Maturation rates of immature porcine oocytes vitrified with stepwise equilibrium in EFS solution using nylon mesh

Abstract

This study was aimed to compare the ability of nylon mesh holder for vitrification of porcine immature cumulus-oocytes complexes (COCs) in ethylene glycol, Ficoll-70 and sucrose (EFS) with the stepwise (five-step) equilibration and single-step method. Vitrified-warmed immature oocytes were cultured in the maturation media NCSU-23 for 44 h and examined the maturation rates. The survival rates of vitrified-warmed oocytes were 83 percent and 84 percent (P GT 0.05) for single step and stepwise groups, respectively. The maturation rates in the stepwise exposure (27 percent) were significantly higher (P LT 0.05) compared to the corresponding rates in the single step (14 percent). Both groups were also shown significant lower (P LT 0.05) than the control group (67 percent). In this experiment, the nylon mesh holder and the stepwise equilibrium in EFS can apply for vitrification of the large amount of immature oocytes.

การศึกษานี้ มีวัตถุประสงค์เพื่อเปรียบเทียบอัตราการเจริญพร้อมปฏิสนธิของโอโอไซต์สุกรหลังการแช่แข็งแบบวิทริฟิเคชั่น ด้วยวิธีการไม่ปรับสมดุล (single step) และปรับสมดุลหลายขั้น (stepwise: five-step) ในสารละลายป้องกันอันตรายจากการแช่แข็งซึ่งประกอบด้วยเอทิลีนไกลคอล ฟิคอล-70 และซูโครส (EFS) โดยใช้ตาข่ายไนลอน โอโอไซต์หลังการแช่แข็งและการทำละลาย นำไปเลี้ยงในน้ำยา NCSU-23 ประมาณ 44 ชม. ตรวจสอบการรอดชีวิตและอัตราการเจริญพร้อมปฏิสนธิที่ระยะเมทาเฟสทู (MII) พบว่า อัตราการรอดชีวิตของโอโอไซต์ในกลุ่มไม่ปรับสมดุลและกลุ่มปรับสมดุลหลายขั้น มีค่าไม่แตกต่างกัน (83 เปอร์เซ็นต์ และ 84 เปอร์เซ็นต์) สำหรับอัตราการเจริญพร้อมปฏิสนธิของโอโอไซต์ในกลุ่มไม่ปรับสมดุล มีค่าเท่ากับ 14 เปอร์เซ็นต์ ซึ่งแตกต่างจากกลุ่มปรับสมดุลหลายขั้นที่มีค่าเท่ากับ 27 เปอร์เซ็นต์ (P น้อยกว่า 0.05) โดยโอโอไซต์ในกลุ่มควบคุมซึ่งไม่ผ่านการแช่แข็งเจริญพร้อมปฏิสนธิได้ 67 เปอร์เซ็นต์ และแตกต่างจากทั้งสองกลุ่ม (P น้อยกว่า 0.05) ผลการทดลองระบุว่าการแช่แข็งโอโอไซต์สุกรที่ยังไม่พร้อมปฏิสนธิในสารละลาย EFS ด้วยการปรับสมดุลแบบหลายขั้นและการใช้ตาข่ายไนลอนขนาดเล็ก มีผลให้โอโอไซต์เจริญพร้อมปฏิสนธิภายหลังการแช่แข็งได้